Genospherebio's blog

One of the most unresolved problems facing the scientific community is figuring out the function of post-translational modification patterns. Significant results from efforts to decipher the phosphorylation bio-barcode point to the possibility that many proteins actually exist in several versions, each with distinct phosphorylation patterns and roles. Peptide libraries make it relatively easy to simulate protein areas while studying highly phosphorylated regions is significantly more difficult. While practically universal techniques can be used to create basic phosphopeptides, the creation of phosphorylated peptide remains a significant synthetic problem. The insertion of multiple phosphate groups into different places on the peptide simultaneously or sequentially when there are numerous other potential modification sites is necessary for the synthesis of multiphosphopeptides.

These groups are heavy, unsteady, and difficult to introduce when they are near together. Furthermore, libraries made up of several peptides with varied levels and positions of phosphorylation are necessary if any methods have been discovered to enable the synthesis of phosphorylated peptides because the same protein region can have numerous alternative phosphorylated peptide patterns. These techniques are fundamentally distinct from those used to make straightforward phosphorylated peptides. We notably highlight the difficulties and significance of synthesizing phosphorylated peptide and their libraries. Modern approaches are given along with the historical viewpoint. The various synthetic strategies attempt to address the unique issues involved in the synthesis of multiphosphopeptides and offer a roadmap for the synthesis of such libraries.

Applications of the phosphorylated peptide

Creation of antibodies specific for the phosphorylation

For proteome identification, mass standards are developed

Development of assays using phosphatase substrates

Quantifying and Mapping sites of phosphorylation

Signal transduction and the cellular signaling pathways

The investigation of structural PTMs that control protein function.

Studying the roles that various disease like pathologies play, such as those in metabolic, neurodegenerative, and cancer.

A los animales de laboratorio, incluidos conejos, cabras y otras criaturas, se les inyecta un antígeno particular para crear anticuerpos policlonales. Para producir mayores títulos de anticuerpos específicos de antígeno, el animal se inmuniza repetidamente. Estas producción de anticuerpos policlonales se pueden extraer y recolectar del antisuero en cuestión de semanas. La fabricación de anticuerpos policlonales es más sencilla y económica que la producción de anticuerpos monoclonales.

Ofrecemos servicios de producción de anticuerpos policlonales que pueden proporcionar anticuerpos purificados en aproximadamente 45 días. Podemos proporcionar anticuerpos policlonales de alta afinidad para necesidades de diagnóstico si solo nos proporciona una secuencia de antígeno.

Hacer un antígeno

La preparación de los antígenos proteicos o peptídicos es el primer paso en el proceso de producción. Cuando se requiere la unión a un epítopo conformacional, es crucial confirmar la calidad del antígeno objetivo. La pureza del antígeno utilizado determina qué tan específico es el anticuerpo policlonal. El tipo de animal utilizado para producir anticuerpos policlonales está determinado por la cantidad de antisuero requerida, la distancia evolutiva entre la especie de origen del animal y la especie que recibirá la inmunización, y la exposición anterior del animal a los inmunógenos. Debido a sus diferencias genéticas con respecto a las fuentes de las proteínas examinadas con mayor frecuencia en humanos y ratones, los conejos suelen ser el animal de elección. Para mejorar la respuesta inmune, se utilizan adyuvantes. El antígeno proteico se administra por vía intramuscular, intradérmica o subcutánea a un animal de la especie seleccionada mientras el adyuvante está presente. Para la purificación de anticuerpos policlonales, una purificación por afinidad es una opción prometedora. Al eliminar la mayoría de las proteínas indeseables, la purificación por afinidad de proteínas puede mejorar la inmunoglobulina en el antisuero crudo. Sin embargo, estas preparaciones todavía incluyen una cantidad significativa de IgG no específicas. La purificación por afinidad específica de antígeno se usa con frecuencia para separar anticuerpos policlonales particulares del antisuero. La mayor parte de la fracción no específica se elimina como consecuencia de la purificación por afinidad al antígeno, que también enriquece la fracción de inmunoglobulina que responde específicamente al antígeno diana.

Seguro de calidad

Para asegurar la calidad de los anticuerpos policlonales, se llevan a cabo varios procedimientos de control de calidad después de la purificación.

Las proteínas y los péptidos son cruciales. Como resultado, la síntesis de péptidos de estas moléculas ha asumido un papel crucial al permitir el estudio de compuestos modelo en el laboratorio que pueden arrojar luz sobre cómo funcionan las proteínas, así como compuestos con un significado farmacológico significativo. Dos péptidos importantes que regulan el azúcar en la sangre son la insulina y el glucagón. La insulina alerta al cuerpo para que comience a almacenar más azúcar cuando los niveles de azúcar en la sangre son altos. El glucagón indica niveles bajos de azúcar en la sangre, lo que puede requerir acceso a largo plazo a las reservas de energía del cuerpo.

Ambas sustancias son cruciales en medicina. Para una proteína, el glucagón tiene una estructura bastante sencilla. Los materiales de partida para la estructura son fácilmente accesibles. Los aminoácidos son bloques de construcción sencillos que se unen para formar una cadena. El concepto de unir dos aminoácidos para crear una cadena lateral es simple. Cuando dos aminoácidos se combinan, cada uno pierde una molécula de agua, lo que permite que las partes restantes se unan para formar el dipéptido. Se debe agregar un tercero con la misma facilidad, y así sucesivamente. Los enlaces amido o peptídicos son extremadamente estables estructuralmente y resistentes a la sustitución de carboxilo.

Las estructuras son las mejores para construir proteínas debido a su estabilidad. Aunque las proteínas están formadas por cadenas muy largas de aminoácidos conectados, su flexibilidad conformacional está restringida de alguna manera. Esto permite que las proteínas mantengan una forma específica. La capacidad de las proteínas para actuar como enzimas y otras proteínas depende de su estructura. La estabilidad del péptido y la rigidez estructural son causadas por las propiedades del enlace peptídico. Se puede decir que la donación de pi que evita que los nucleófilos se sustituyan en el carbonilo es lo suficientemente fuerte como para formar un enlace adicional. De acuerdo con los análisis de estructura de rayos X, los nitrógenos peptídicos de las proteínas son planos triangulares, no piramidales. Además, la isomería cis-trans está presente en muchos péptidos. Dependiendo de si un sustituyente unido al nitrógeno está en el mismo lado del enlace que el oxígeno del carbonilo o en el lado opuesto, pueden existir dos isómeros distintos para cada enlace peptídico.

A chemically created peptide with the native sequence is known as a stable isotope-labeled peptide. Such tagging causes a peptide's mass to differ from its parental peptide. The natural peptide can be directly and extremely effectively quantified in samples taken from the living body using analysis of the tagged peptide. Design your peptide using the multiple stable isotope-labeled amino acids to achieve the desired mass difference. Utilizing mass spectrometric analysis, the natural peptide can be easily and effectively quantified.

Because stable isotopes are not radioactive, utilize them as usual. Numerous conceivable changes, including the creation of disulfide bonds, glycosylation, phosphorylation, etc. are taken directly from the living body without any pre-treatments like enzymatic digestion, reduction or alkylation of disulfide bonds, etc.

Application to protein quantitation

In research, the use of stable, non-radioactive isotope-labeled peptides for simple detection is growing. The process of replacing specific atoms in normal amino acids with their heavy isotope counterparts results in isotope-labeled, or heavy, amino acids.

The physiochemical characteristics and chemical reactivity of stable-isotope-labeled peptides are the same as those of their unlabeled counterparts apart from a few exceptions. Labeled and unlabeled peptides, however, behave differently in some situations due to the slight mass difference. The use of stable isotope-labeled peptides in numerous absolute quantification applications, including quantitative proteomics, the quantification of complex protein mixtures at extremely low concentrations, is based on this.

We have created lots of these peptides. For the solid-phase peptide synthesis in our lab, only the highly enriched stable amino acids from the premium provider are used to create these peptides. These amino acids all have above 99% isotopic purity and are equally labeled. These crucial characteristics have made it possible for us to successfully meet the fluctuating demand for high-quality compounds. To determine the final purity and to ensure that our customers only receive the best peptides for absolute quantification, all stable isotope-tagged peptides go through a rigorous analytical examination.